domicile » Interrupteurs et prises » Etudes microbiologiques de l'eau. OKB et TKB : méthodes membranaires et de titrage

Etudes microbiologiques de l'eau. OKB et TKB : méthodes membranaires et de titrage

Commentaires sur le tableau. En estimant le nombre d'OKB et de TKB dans 100 cm 3 d'eau, au moins trois volumes d'eau (100 cm 3 chacun) doivent être analysés. Lors de l'évaluation de l'OKB et du PMCh, un excès de la norme n'est pas autorisé dans 95% des échantillons prélevés au cours de l'année. Les coliphages sont déterminés uniquement dans les systèmes d'approvisionnement en eau à partir de sources de surface avant d'alimenter en eau le réseau de distribution, il en va de même pour la présence de kystes de lamblia. La teneur en spores de clostridies sulfito-réductrices n'est déterminée que lors de l'évaluation de l'efficacité de la technologie de traitement de l'eau. En cas de détection de TKB, OKB, coliphages ou d'au moins un des indicateurs indiqués, une deuxième étude d'urgence de l'eau est à nouveau réalisée sur TKB, OKB et coliphages. Dans le même temps, l'eau est testée pour les chlorures, l'azote ammoniacal, les nitrates et les nitrites. Si, dans l'échantillon répété, plus de deux OKB dans 100 cm 3 et/ou TCB et/ou coliphages sont détectés, alors une étude est réalisée pour les bactéries pathogènes du groupe intestinal et/ou les entérovirus. La même étude pour les entérobactéries et entérovirus pathogènes est réalisée selon les indications épidémiologiques par décision des centres territoriaux de Rospotrebnadzor.

Bactéries coliformes thermotolérantes (TCB) font partie de l'OKB et ont toutes leurs caractéristiques, mais, contrairement à eux, ils sont capables de fermenter le lactose en acide, aldéhyde et gaz à une température de +44 ° C pendant 24 heures. Ainsi, le TKB diffère de l'OKB par la capacité à fermenter le lactose en acide et en gaz à une température plus élevée.

Les indicateurs à déterminer, le nombre et la fréquence des études dépendent du type de source d'approvisionnement en eau, de la taille de la population desservie en eau à partir d'un système d'approvisionnement en eau donné. Ces données sont données dans SanPiN 2.1.4.1074-01... Dans les directives pour les analyses sanitaires et microbiologiques boire de l'eau (MUK 4.2.1018-01 du ministère de la Santé de la Fédération de Russie) les méthodes de contrôle de la qualité sanitaire et microbiologique de l'eau potable sont réglementées.

Nombre total de micro-organismes est le nombre total de micro-organismes aérobies et anaérobies facultatifs (MAFanM) visibles avec un doublement des mésophiles (avec un optimum de température de +37°C) qui sont capables de former des colonies sur gélose nutritive à une température de +37°C pendant 24 heures 1 ml d'eau est ajouté à une boîte de Pétri stérile et versé avec de la gélose mésopatamique fondue (température ne dépassant pas +50 ° C), et en une journée, le nombre de colonies cultivées est compté.

DÉTERMINATION DES OKB ET TKB PAR LA MÉTHODE DES FILTRES À MEMBRANE

La méthode est basée sur le filtrage de certains volumes d'eau à travers des filtres à membrane. À ces fins, des filtres d'un diamètre de pores de 0,45 micron et d'une taille de 35 ou 47 mm de diamètre sont utilisés (filtres domestiques "Vladipor" MFAS-S-1, MFAS-S-2, MFAS-MA (n° 4- 6) ou étrangers - ISO 9000 ou EN 29000). Préparez les filtres à membrane pour l'analyse conformément aux instructions du fabricant.

DÉTERMINATION DE OKB ET TKB PAR LA MÉTHODE DE TITRAGE

La méthode est basée sur l'accumulation de bactéries après ensemencement de certains volumes d'eau dans des milieux nutritifs liquides, suivie d'un repiquage sur milieu dense différentiel avec du lactose et d'une identification des colonies par des tests culturels et biochimiques. Dans l'étude de l'eau potable par une méthode qualitative (surveillance sanitaire et épidémiologique actuelle), trois volumes de 100 cm 3 sont ensemencés. Lors de l'examen de l'eau aux fins de la détermination quantitative de l'OKB et du TKB (analyse répétée), 100, 10 et 1 cm 3, respectivement, sont inoculés - trois volumes de chaque lot.

ÉTUDE SANITAIRE-MICROBIOLOGIQUE DU SOL

Le sol fournit un abri à une variété de micro-organismes. Ainsi, le nombre de bactéries dans le sol atteint à lui seul 10 milliards de cellules dans 1 g. Les micro-organismes sont impliqués dans la formation et l'auto-épuration du sol, dans la circulation de l'azote, du carbone et d'autres éléments dans la nature. En plus des bactéries, il est habité par des champignons, des protozoaires et des lichens, qui sont une symbiose de champignons avec des cyanobactéries. Il y a relativement peu de micro-organismes à la surface du sol en raison de l'effet destructeur des rayons UV, du dessèchement et d'autres facteurs. La couche de sol arable de 10 à 15 cm d'épaisseur contient le plus grand nombre de micro-organismes. Au fur et à mesure qu'il s'approfondit, le nombre de micro-organismes diminue jusqu'à ce qu'ils disparaissent à une profondeur de 3 à 4 m. La composition de la microflore du sol dépend de son type et de son état, de la composition de la végétation, de la température, de l'humidité, etc. La plupart des micro-organismes du sol sont capables de se développer à un pH neutre, une humidité relative élevée et des températures de 25 à 45°C.

Les bacilles sporulés de l'accouchement vivent dans le sol Bacille et Closlridium. Bacilles non pathogènes (Vous. Megaterium, vous. Subtilis et etc.). avec les pseudomonades, les proteus et quelques autres bactéries s'ammonifient, constituant un groupe de bactéries putréfiantes qui effectuent la minéralisation matière organique... Les bacilles sporulés pathogènes (agents responsables du charbon, du botulisme, du tétanos, de la gangrène gazeuse) peuvent persister longtemps et certains se multiplient même dans le sol ( Clostridiumbotulique). Le sol abrite également des bactéries fixatrices d'azote qui assimilent l'azote moléculaire. (Azotobacter, Azomonas, Mycobacterium et etc.). Des variétés de cyanobactéries fixatrices d'azote, ou algues bleu-vert, sont utilisées pour augmenter la fertilité des rizières.

Des représentants de la famille des bactéries intestinales (fam. Entérobactéries) - Escherichia coli, agents responsables de la fièvre typhoïde, de la salmonellose et de la dysenterie, meurent une fois dans le sol avec des matières fécales. Dans les sols propres, E. coli et Proteus sont rares; La détection de bactéries du groupe Escherichia coli (bactéries coliformes) en quantités importantes est un indicateur de contamination des sols par des excréments humains et animaux et indique son inconvénient sanitaire et épidémiologique en raison de la possibilité de transmission d'agents pathogènes d'infections intestinales. Le nombre de protozoaires dans le sol varie de 500 à 500 000 pour 1 g de sol. Se nourrissant de bactéries et de débris organiques, les protozoaires provoquent des changements dans la composition de la matière organique du sol. Il existe également de nombreux champignons dans le sol, dont les toxines, s'accumulant dans les produits alimentaires humains, provoquent des intoxications - mycotoxicose et aflatoxicose.

Les résultats de l'étude des sols sont pris en compte pour déterminer et prévoir leur degré de dangerosité pour la santé et les conditions de vie de la population dans les agglomérations (selon les indications épidémiologiques), la prévention des maladies infectieuses et non infectieuses (prévention sanitaire surveillance), le contrôle sanitaire actuel des installations qui affectent directement ou indirectement l'environnement. ...

Lors de la réalisation de la surveillance sanitaire actuelle de l'état du sol, elles se limitent à une brève analyse sanitaire et microbiologique, indiquant la présence et le degré de contamination fécale. Les indicateurs inclus dans ce groupe caractérisent également les processus d'autonettoyage des sols à partir de polluants organiques et d'entérobactéries. Une analyse sanitaire et microbiologique complète du sol est réalisée sous forme de surveillance sanitaire préventive. L'effet des polluants chimiques sur la biogéocénose passe par l'étude de leur effet bactéricide sur le microbiote du sol, en conséquence : une modification de la communauté des microorganismes du sol, l'activité enzymatique du sol. Selon les indications épidémiques, une indication de microbiote pathogène est réalisée.

Au laboratoire, un échantillon moyen est préparé à partir de 5 échantillons de sol prélevés sur un site, en mélangeant soigneusement et en frottant dans un plat en porcelaine stérile avec un pilon en caoutchouc pendant 5 minutes. Les impuretés (racines de plantes, cailloux, copeaux) sont éliminées en tamisant le sol à travers un tamis, qui est préalablement essuyé avec un coton-tige imbibé d'alcool éthylique à 96%. Des portions pesées sont prélevées sur l'échantillon moyenné (de 1 à 50-55 g, selon la liste d'indicateurs à déterminer) et une suspension 1:10 est préparée dans de l'eau du robinet stérile (10 g de sol pour 90 cm 3 d'eau ). Pour la désorption des micro-organismes de la surface des particules de sol, la suspension de sol préparée est agitée pendant 3 minutes sur un mélangeur disperseur mécanique. Après décantation de la suspension pendant 30 s, des dilutions successives par 10 du sol sont préparées à une concentration de 10 -4 -10 -5 g/cm 3.

L'évaluation des résultats des études sanitaires et microbiologiques des sols est réalisée en comparant les données obtenues sur des parcelles expérimentales et témoins de sols de même composition, situées à proximité immédiate du territoire. Des schémas d'évaluation de l'état sanitaire du sol sur la base de critères sanitaires et microbiologiques individuels sont présentés dans UM n° 14446-76(Tableau 2).

Tableau 2. Schéma d'évaluation de l'état sanitaire du sol par indicateurs microbiologiques (selon UM n° 1446-76)

	Titre (g)			Indice de microorganisme thermophile (nombre de cellules/g)
	BGKP	Bactéries nitrifiantes	Clostridium
			0,01 et plus
Contaminé
Fortement contaminé	0,009 et moins	0,0009 et moins	0,00009 et moins

V MU 2.1.7.730–99 « Évaluation hygiénique de la qualité des sols dans les zones peuplées » présente un schéma d'évaluation du risque épidémique des sols en zones peuplées. Dans ce document, pour évaluer l'intensité de la charge biologique sur le sol, de tels indicateurs sont utilisés comme le BGKP et l'indice entérocoque, et pour évaluer le risque épidémique du sol, les entérobactéries et entérovirus pathogènes sont utilisés.

RECHERCHE SUR L'OBSERVATION MICROBIENNE DE L'ENVIRONNEMENT AÉRIEN

Les micro-organismes pénètrent dans l'air à partir du sol, de l'eau, ainsi que de la surface du corps, des voies respiratoires et des gouttelettes de salive des humains et des animaux. On y trouve des bactéries coccoïdes et en forme de bâtonnet, des bacilles, des clostridies, des actinomycètes, des champignons et des virus. L'air est considéré comme un facteur de transmission des infections respiratoires, dans lesquelles l'agent pathogène est transmis par des gouttelettes ou des poussières en suspension dans l'air. Les rayons du soleil et d'autres facteurs contribuent à la mort de la microflore de l'air. Pour réduire la contamination microbienne de l'air, un nettoyage humide de la pièce est effectué en combinaison avec une ventilation et une purification (filtration) de l'air entrant. Ils utilisent également la désinfection par aérosol et le traitement des locaux avec des lampes ultraviolettes (par exemple, dans les laboratoires de microbiologie et les salles d'opération).

De nombreux micro-organismes sont contenus dans l'air intérieur, dont la contamination microbienne dépend des conditions de nettoyage, du niveau d'éclairement, du nombre de personnes dans la pièce, de la fréquence de ventilation, etc. De plus en plus de micro-organismes sont présents dans l'air des grandes villes , moins dans l'air des zones rurales. Il y a surtout peu de micro-organismes dans l'air au-dessus des forêts, des montagnes et des mers.

L'examen microbiologique de l'air permet de déterminer la teneur totale en micro-organismes, ainsi qu'en staphylocoques dans 1 m 3 d'air. Dans certains cas, l'air est testé pour les bactéries gram-négatives, les moisissures et les champignons de type levure. Selon les indications épidémiques, la gamme des agents pathogènes détectés dans l'air peut être élargie.

Des échantillons d'air sont prélevés par la méthode d'aspiration à l'aide de l'appareil de Krotov.

L'utilisation de la méthode de sédimentation de Koch est tout à fait acceptable. Les locaux suivants des établissements médicaux font l'objet d'enquêtes - blocs opératoires, salles de pansement et de traitement, services d'asepsie (boîtes), services de l'unité d'anesthésiologie et de soins intensifs, services et couloirs des services médicaux, locaux des pharmacies, des services de stérilisation et d'obstétrique et gynécologie départements et stations de transfusion sanguine (départements).

L'étude de l'air par la méthode de Koch est utilisée dans des cas extrêmement rares pour évaluer grossièrement le degré de pollution microbienne de l'air. Pour déterminer le nombre total de micro-organismes dans l'air des salles d'opération, avant de commencer le travail, ouvrez des plaques avec de la gélose nutritive et placez-les approximativement à la hauteur de la table d'opération - une plaque au centre et quatre dans les coins de la pièce (" méthode de l'enveloppe") pendant 10 minutes, et pour identifier Staphylococcus aureus (des plaques avec de la gélose jaune-saline (YSA) sont utilisées - pendant 40 minutes Les cultures sont incubées dans un thermostat à +37 ° C et pendant 24 heures à température ambiante, puis le nombre de colonies est compté. 2 surfaces du milieu nutritif pendant 5 minutes d'exposition, la quantité de bactéries se dépose, qui est contenue dans 10 litres d'air (1 m3 contient 1000 litres). En même temps, plus de 5 colonies des micro-organismes ne devraient pas se développer sur des plaques avec de la gélose nutritive, et Staphylococcus aureus ne devrait pas être détectable.

CONTRLE SANITAIRE ET MICROBIOLOGIQUE DES INSTALLATIONS À DESTINATION ALIMENTAIRE

Les produits alimentaires peuvent être contaminés par divers micro-organismes, ce qui entraîne leur détérioration, le développement d'infections et d'intoxications alimentaires, ainsi que des infections telles que le charbon, la brucellose, la tuberculose, etc. Les maladies de l'animal, les traumatismes ou les conditions défavorables de sa détention contribuent à la violation des barrières de protection du corps et à la translocation (transfert) de micro-organismes vers des tissus et organes généralement stériles (ensemencement intravital). En conséquence, les tissus de l'animal abattu sont ensemencés avec des protéas, des clostridies et d'autres microbes ; entrer dans le lait des staphylocoques et des streptocoques atteints de mammite. Une contamination secondaire des aliments par des micro-organismes est également possible. Dans ce cas, la source de pollution sont les objets environnement(sol, eau, transports, etc.) ainsi que les personnes malades et porteuses de bactéries. Aux basses températures de stockage de la viande et produits carnés même la viande congelée peut être dominée par des microbes capables de se multiplier dans des conditions psychrophiles (pseudomonas, proteus, aspergillus, penicilla, etc.). Les microbes vivant dans la viande la rendent muqueuse; dans celui-ci, des processus de fermentation et de décomposition se développent, causés par les clostridies, les proteus, les pseudomonades et les champignons.

Les céréales, les noix dans des conditions d'humidité élevée peuvent être contaminées par des champignons (aspergillus, penicilli, fusarium, etc.), ce qui provoque le développement de mycotoxicoses alimentaires.

Les plats de viande (gelées, salades de viande, plats de viande hachée) peuvent provoquer des maladies associées à Salmonella, Shigella, Escherichia coli diarrhéogène, Proteus, souches entérotoxinogènes de staphylocoques, entérocoques, qui s'y sont multipliées, Closlridium perfringens et Bacillus cereus.

Le lait et les produits laitiers peuvent être un facteur de transmission des agents pathogènes de la brucellose, de la tuberculose et de la shigellose. Il est également possible le développement d'intoxications alimentaires à la suite de la reproduction de salmonelles, de shigelles et de staphylocoques dans les produits laitiers. Les œufs, la poudre d'œuf et le mélange avec une primo-infection endogène avec des œufs de Salmonella, en particulier des œufs de cane, sont à l'origine de la salmonellose.

Le poisson et les produits à base de poisson sont plus susceptibles d'être contaminés par des bactéries Closridium botulinum et Vibrio parahaemolylicus- agents responsables d'intoxications alimentaires et de toxicoinfections. Ces maladies sont également observées lors de la consommation de produits à base de poisson contaminés par un grand nombre de Salmonella, Proteus, Bacillus cereus, Closlridium perfringens.

Les légumes et les fruits peuvent être contaminés et contaminés par E. coli diarrhéogène, Shigella, Proteus, des souches entéropathogènes de staphylocoques. Les concombres marinés peuvent être la cause d'une infection toxique causée par Vibrio parahaemolyticus.

Tous les résultats de l'analyse microbiologique des produits alimentaires peuvent être obtenus au plus tôt 48 à 72 heures, c'est-à-dire lorsque le produit peut déjà être mis en œuvre. Par conséquent, le contrôle de ces indicateurs est de nature rétrospective et sert à des fins d'évaluation sanitaire et hygiénique d'une entreprise qui produit ou vend des produits alimentaires.

La détection d'une contamination microbienne totale accrue, des bactéries coliformes, suggère une violation du régime de température lors de la préparation et/ou du stockage du produit fini. La détection de micro-organismes pathogènes est considérée comme un indicateur du mal-être épidémiologique de la cantine et des entreprises commerciales.

La normalisation des indicateurs microbiologiques de la sécurité sanitaire des aliments est réalisée pour la plupart des groupes de micro-organismes selon un principe alternatif, c'est-à-dire le poids du produit est normalisé, dans lequel les bactéries du groupe Escherichia coli, la plupart des micro-organismes pathogènes sous certaines conditions, ainsi que les micro-organismes pathogènes, incl. salmonelles et Listeria monocytogenes... Dans les autres cas, la norme reflète le nombre d'unités formant colonie dans 1 g (cm 3) de produit (UFC/g, cm 3).

Dans les produits de grande consommation pour lesquels les tableaux SanPiN 2.3.2.1078-01. Exigences hygiéniques pour la sécurité alimentaire et la valeur nutritionnelle il n'y a pas de normes microbiologiques, micro-organismes pathogènes, incl. les salmonelles ne sont pas autorisées dans 25 g de produit.

Les objets de préparation et de vente des produits alimentaires doivent être soumis à un contrôle sanitaire et bactériologique.

Les données de la recherche sanitaire et microbiologique permettent d'évaluer objectivement l'état sanitaire et hygiénique des objets examinés, d'identifier les violations du régime sanitaire et de prendre rapidement des mesures ciblées pour les éliminer.

Il existe plusieurs méthodes d'échantillonnage à partir de divers équipements et inventaires pour la recherche microbiologique : méthodes de lavages sur écouvillon, empreintes, remplissage en gélose. Parmi celles-ci, la méthode la plus couramment utilisée est le lavage au tampon.

Le contrôle sanitaire et microbiologique repose sur la détection des bactéries E. coli (BCGC) dans les lavages - indicateurs de contamination fécale des objets étudiés. Des tests pour le staphylocoque doré, bactéries pathogènes de la famille intestinale, la détermination de la contamination microbienne totale sont effectués selon les indications. Par exemple, il est nécessaire de prélever des écouvillons pour détecter les staphylocoques lors de l'examen des confiseries, des cuisines laitières et des unités de restauration des établissements médicaux.

Objets du contrôle sanitaire et microbiologique :

∨ lavages des mains et des combinaisons des travailleurs de l'alimentation (approvisionnement en eau) ;

équipement, inventaire, vaisselle et autres objets ;

∨ plats cuisinés, produits culinaires et périssables ;

∨ matières premières et produits semi-finis en cours de processus technologique (selon les indications épidémiologiques) ;

∨ eau potable à partir de sources d'approvisionnement en eau centralisées et surtout décentralisées.

Les lavages des mains du personnel de transformation des aliments crus sont collectés avant le travail. Les lavages sont livrés au laboratoire de bactériologie dans les 2 heures, ils peuvent être stockés et transportés au maximum 6 heures à une température de + 1 à 10 ° C.

Au laboratoire, des cultures de lavages sont réalisées sur des milieux Kessler avec du lactose ou du KODA, tandis qu'un écouvillon est descendu dans un tube à essai avec le milieu et le liquide de rinçage restant est transféré. Les inoculations sur milieux Kessler et KODA sont incubées à 37°C.

Après 18-24 heures, à partir de tous les tubes avec le milieu de Kessler, ensemencer les secteurs de plaques avec le milieu d'Endo, à partir du milieu de KODA, le semis n'est effectué que si la couleur du milieu change (du violet initial au jaune ou vert) ou s'il devient trouble. Les cultures en milieu Endo sont cultivées à 37 ° C pendant 18 à 24 h.

A partir des colonies caractéristiques de BGKP, des frottis sont préparés, colorés selon Gram, microscopiques, si nécessaire, en outre identifiés par des tests standards pour les bactéries du groupe E. coli. Lors de l'évaluation des résultats de l'examen sanitaire et microbiologique, ils partent des normes selon lesquelles il ne devrait pas y avoir de BGKP dans les lavages provenant des installations alimentaires. La détection d'un GKP dans les chasses d'eau des surfaces propres, préparées pour les éléments de travail, l'inventaire, l'équipement, les mains et les vêtements hygiéniques du personnel indique une violation du régime sanitaire. En cas de détection répétée de BHKP dans un pourcentage important de lavages, il est recommandé de réaliser une étude des lavages pour la présence d'entérobactéries pathogènes. Dans ce cas, l'ensemencement du tampon et du liquide de rinçage est réalisé sur le milieu d'enrichissement - bouillon sélénite ou milieu magnésium (il est possible d'utiliser les milieux Mueller et Kaufman). Des recherches supplémentaires sont effectuées selon la méthode généralement acceptée.

RECHERCHE DE LAIT ET PRODUITS LAITIERS

MICROFLORE DES PRODUITS LAITIERS

Le lait est un terreau très favorable au développement de nombreux micro-organismes. Après avoir mangé du lait et des produits laitiers infectés, des infections telles que la fièvre typhoïde, la dysenterie, le choléra, l'escherichiose, la brucellose, la tuberculose, la scarlatine, l'amygdalite, la fièvre Q, la fièvre aphteuse, l'encéphalite à tiques, les infections à salmonelles toxico et l'empoisonnement à la cocaïne staphyloxinum peut se produire.

Distinguer la microflore spécifique et non spécifique du lait et des produits laitiers.

À microflore spécifique du lait et des produits laitiers comprennent les microbes - agents pathogènes de la fermentation de l'acide lactique, alcoolique et propionique. Des processus microbiologiques dus à l'activité vitale de ces micro-organismes sous-tendent la préparation de produits laitiers fermentés (fromage cottage, kéfir, yaourt, acidophilus, etc.).

Les bactéries de fermentation lactique sont considérées microflore normale du lait et des produits laitiers ... Le rôle principal dans l'acidification du lait et des produits laitiers est joué par les streptocoques lactiques S. lactis, S. cremaris et al. Races moins actives de streptocoques lactiques ( S. citrovorus, S. lactis subsp. diacétylactis) produisent des acides volatils et des substances aromatiques et sont donc largement utilisés dans la fabrication de fromages. Le groupe des bactéries lactiques comprend également les bâtonnets d'acide lactique : Lactobacterium bulgaricum, Lactobacterium casei, Lactobacterium acidophilus etc.

Les principaux agents responsables de la fermentation alcoolique dans le lait et les produits laitiers sont les levures ( Saccharomyces lactis et etc.).

Microflore non spécifique du lait constituent des bactéries putréfiantes ( Protée), bacilles aérobies et anaérobies ( B. subtilis, B. megatherium, C. putrificum) et plein d'autres

La contamination microbienne du lait commence déjà dans la mamelle. Au cours de la traite, son ensemencement supplémentaire se produit à partir de la surface de la peau du pis, des mains, d'un vaisseau où il pénètre et de l'air de la pièce. L'intensité de cet ensemencement supplémentaire dépend généralement du respect des conditions sanitaires et hygiéniques de base lors de la réception du lait. De mauvaises conditions de stockage du lait peuvent également contribuer à la poursuite de la croissance de la microflore.

Phase bactéricide. Le lait fraîchement trait, bien qu'il contienne déjà des centaines de microbes dans 1 cm 3 (principalement des staphylocoques et des streptocoques), possède des propriétés bactéricides dues à la présence d'anticorps normaux dans celui-ci. Par conséquent, pendant une certaine période, le développement des bactéries dans le lait est retardé. Cette période est appelée phase bactéricide. La durée de la phase bactéricide varie de 2 à 36 heures, selon les caractéristiques physiologiques de l'animal (au début de la lactation, l'activité bactéricide du lait est plus élevée).

Le stockage du lait à des températures élevées (30-37 ° C) raccourcit considérablement la durée de la phase bactéricide. Le même effet est exercé par l'ensemencement supplémentaire intensif de lait avec des microbes.

Une fois la phase bactéricide terminée, le développement de la microflore commence. Sa composition en espèces change au cours du temps sous l'influence de changements dans les propriétés biochimiques de l'environnement et en raison de relations antagonistes et symbiotiques entre les espèces microbiennes.

La phase de microflore mixte. Il dure environ des heures 12. Au cours de cette période, la prédominance de tous les groupes d'espèces de microbes ne se produit pas encore, car l'abondance du substrat nutritif et les capacités spatiales permettent à de nombreux types de micro-organismes de se développer assez librement.

La phase des streptocoques lactiques. Dans cette phase, la prédominance des micro-organismes du groupe nommé ( S. lactis, S. termofilus, S. cremoris et etc.). Le lactose est intensément converti par eux en acide lactique, la réaction passe du côté acide. L'accumulation d'acide lactique conduit, à l'avenir, à la mort des streptocoques lactiques et à leur remplacement par des bactéries lactiques plus résistantes aux acides. Cela arrive 48 heures plus tard, marquant le début de la troisième phase.

La phase d'adhérence de l'acide lactique. Dans celui-ci, les formes en forme de bâtonnets de bactéries lactiques acquièrent une position dominante. ( L. lactis, L. crusei, L. bulgaricum et etc.). La réaction acide de l'environnement qui en résulte entraîne une inhibition de la croissance et la mort progressive d'autres types de bactéries.

À la fin de la troisième phase, d'autres possibilités de développement de la microflore lactique sont épuisées et des champignons viennent remplacer, pour lesquels l'acide lactique sert de substrat nutritif.

Phase de microflore fongique. Durant cette période, se développent des moisissures et des levures dont l'activité vitale entraîne la perte du produit de sa valeur nutritionnelle. La levure est représentée principalement par des espèces du genre Torula, on trouve moins souvent certains types de saccharomycètes.

De moules il y a : moule de lait ( Oïdium lactis), recouvrant la surface du yaourt et de la crème sure en forme de canon, ainsi que des aspergillus, pénicillique et mucoreux.

L'action de la flore fongique neutralise le milieu, ce qui le rend à nouveau adapté aux bactéries. Des bactéries putréfiantes se développent, provoquant une protéolyse de la caséine et, enfin, un groupe de bactéries anaérobies sporulées à base d'acide butyrique.

L'activité de la microflore changeante ne s'arrête qu'avec le début de la minéralisation complète de toutes les substances organiques du lait.

Dans certaines conditions, le processus de modification des biocénoses microbiennes peut s'écarter du schéma ci-dessus. Ainsi, les bactéries lactiques peuvent être supprimées dès le début par les microbes du groupe E. coli, si ces derniers sont présents dans un grand nombre... La levure peut produire des concentrations notables d'alcool, ce qui est le cas dans des produits tels que le kéfir (0,2-0,6%) et surtout le koumiss (0,9-2,5%). La présence d'alcool crée des conditions pour le développement ultérieur de bactéries acétiques qui fermentent l'alcool en acide acétique. La présence d'antibiotiques et d'autres substances inhibant et neutralisant la microflore dans le lait peut également ralentir les processus d'acide lactique.

OKB est une qualification internationale, et ils sont inclus dans un grand groupe de BGKP (bactéries du groupe E. coli). La teneur en OKB dans l'eau peut être déterminée par deux méthodes : la méthode des filtres à membrane et la méthode de titrage (fermentation).

Etude de l'eau par la méthode des filtres membranaires. La méthode est basée sur la filtration d'un volume d'eau défini à travers des filtres à membrane, la culture des cultures sur un milieu de diagnostic différentiel et l'identification ultérieure des colonies par leurs caractéristiques culturelles et biochimiques.

Méthode de titrage pour l'étude de l'eau. La méthode est basée sur l'accumulation de bactéries après ensemencement d'un volume d'eau déterminé dans un milieu nutritif liquide, suivie d'un repiquage sur milieu de diagnostic différentiel et d'une identification des colonies par des tests culturels et biochimiques.
Les « organismes coliformes » appartiennent à la classe des bactéries à Gram négatif, sous forme de bâtonnets qui vivent et se multiplient dans la partie inférieure du tube digestif de l'homme et de nombreux animaux à sang chaud, comme le bétail et la sauvagine, capables de fermenter le lactose. à 35-37 ° C avec formation d' acide , de gaz et d' aldéhyde . Entrant dans l'eau avec des déchets fécaux, ils sont capables de survivre plusieurs semaines, bien que la grande majorité d'entre eux soient privés de la capacité de se reproduire.

D'après les recherches dernières années Avec les bactéries Escherichia (E. Coli), Citrobacter, Enterobacter et Klebsiela appartenant habituellement à cette classe, il comprend également les bactéries Enterobacter cloasae et Citrobadter freundii capables de fermenter le lactose. Ces bactéries peuvent être trouvées non seulement dans les matières fécales, mais aussi dans l'environnement, et même dans l'eau potable avec une concentration relativement élevée. nutriments... De plus, cela inclut les espèces qui sont rarement ou pas du tout trouvées dans les matières fécales et sont capables de se reproduire dans une eau de qualité suffisamment bonne.

TCB - bactéries coliformes thermotolérantes. Le nombre de TCB caractérise le degré de contamination fécale de l'eau dans les plans d'eau et détermine indirectement le danger épidémique par rapport aux agents pathogènes des infections intestinales. TKB est déterminé par les mêmes méthodes que BGKP (OKB).
L'échantillonnage pour les études sanitaires et microbiologiques doit être effectué dans le respect des règles de stérilité et de toutes les conditions nécessaires réglementées pour chaque objet à l'étude par les documents réglementaires pertinents.

Des erreurs d'échantillonnage entraîneront des résultats incorrects. Lors de l'emballage et du transport des échantillons, il est nécessaire de créer des conditions qui excluent la mort ou la multiplication du microbiote d'origine dans l'objet à tester. Par conséquent, les échantillons collectés doivent être livrés au laboratoire pour la recherche dès que possible.

Méthode de titrage

La méthode est basée sur l'accumulation de bactéries après ensemencement de certains volumes d'eau dans des milieux nutritifs liquides, suivie d'un repiquage sur milieu dense différentiel avec lactose et identification des colonies par culture et tests biochimiques. Dans l'étude de l'eau potable par une méthode qualitative, trois volumes de 100 cm3 sont ensemencés. Lors de l'examen de l'eau d'un pilier | pour la détermination quantitative de OKB et TKB (analyses répétées), 1,10 et 100 cm3, respectivement, sont inoculés - trois volumes de chaque lot.

Des récoltes de 10 et 100 cm3 d'eau sont réalisées respectivement dans 1 et 10 cm3 du milieu de stockage - LPS concentré sans indicateur. L'ensemencement de 1 cm3 de l'échantillon est réalisé dans 10 cm3 de LPS de concentration normale. Les inoculations sont incubées à 37°C pendant 48 heures.Après 24 heures, un bilan préliminaire des inoculations est réalisé dans le milieu d'accumulation. A partir de récipients où l'on constate la présence de croissance (turbidité) et la formation de gaz, le matériel est ensemencé avec une boucle bactériologique sur des secteurs du milieu Endo pour obtenir des colonies isolées. Les récipients sans signes visibles de croissance ou de formation de gaz sont laissés au four jusqu'à 48 heures et réexaminés pour une évaluation finale.

Les résultats des cultures sans signes de croissance sont considérés comme négatifs et ne font pas l'objet d'une étude plus approfondie. A partir de conteneurs où la turbidité est constatée et le semis se fait sur les secteurs du milieu Endo. Les inoculations sur milieu Endo sont incubées à une température de 37°C pendant 18-20 heures.Quand apparaît une turbidité, formation de gaz dans le milieu d'accumulation et croissance sur milieu Endo de colonies typiques des bactéries lactose-positives : rouge foncé ou rouge, avec ou sans reflet métallique, convexe avec un centre rouge et une empreinte sur le milieu nutritif, donnent une conclusion positive sur la présence d'OKB dans un volume d'échantillon donné.

La présence de l'OKB doit être confirmée dans les cas suivants :

ü seule la turbidité a été notée dans le milieu d'accumulation ;

ü L'appartenance à des colonies lactose-positives est discutable.

Pour confirmer la présence de l'OKB, effectuez les actions suivantes :

1.Vérifier la présence d'une empreinte sur le milieu d'Endo après avoir retiré une colonie suspecte avec une boucle ;

2. effectuer un test d'oxydase ;

3. vérifier l'appartenance au groupe Gram ;

4. Confirmer la capacité à la formation de gaz lors de l'ensemencement de 1-2 colonies isolées de tous types de chaque secteur sur le milieu de confirmation (LPS avec indicateur), suivi d'une incubation des inoculations à 37°C pendant 24-48 heures.

En l'absence de colonies isolées, l'étalement est réalisé sur milieu Endo par les méthodes classiques. Une conclusion négative est donnée si :

ü il n'y a aucun signe de croissance dans l'environnement d'accumulation ;

ü il n'y a pas de croissance dans les secteurs de l'environnement Endo ;

ü des colonies peu caractéristiques des bactéries coliformes se sont développées sur les secteurs du milieu Endo (transparentes, à bords irréguliers, floues) ;

ü toutes les colonies étaient oxydase-positives ;

ü toutes les colonies étaient Gram-positives ;

ü aucune formation de gaz n'a été constatée lors du test de confirmation sur le milieu LPS avec un indicateur.

Pour déterminer le TCB, ils travaillent avec les secteurs du milieu Endo, où les colonies lactose + typiques se sont développées. Deux ou trois colonies isolées de chaque type sont inoculées à partir de chaque secteur dans des tubes à essai avec l'un des milieux de stockage lactose, incubés à 44°C pendant 24 heures. Avec la formation de gaz dans le milieu d'accumulation de lactose, la croissance de bactéries endo-lactose positives sur le milieu, et l'identification de la capacité à fermenter le lactose en acide et en gaz en confirmant les milieux lactose à une température de 44°C pendant 24 heures, une conclusion positive est faite quant à la présence de TKB dans ce volume d'eau. Dans une étude qualitative (lors de l'examen de trois volumes de 100 cm3 chacun, lorsqu'un OKB et un TKB sont trouvés dans au moins un des trois volumes, un enregistrement est fait : « Found an OKB et TBC in 100 cm3 ».

Lors de la recherche par une méthode quantitative, NHF, OKB et TKB sont déterminés selon des tableaux spéciaux. En cas de résultats négatifs de l'étude pour la présence d'OKB et de TKB dans tous les volumes investigués, ils émettent une conclusion : « OKB et TKB dans 100 cm3 n'ont pas été trouvés ».

Les exigences d'hygiène pour la qualité de l'eau pour la consommation et les besoins domestiques sont basées sur le principe qui met l'accent sur la qualité de l'eau, dont dépendent la santé humaine et les conditions de vie. Conformément à la législation sanitaire moderne, l'eau potable doit être sûre en termes épidémiques et radiologiques, inoffensive en composition chimique et ont des propriétés organoleptiques favorables.

La sécurité épidémique de l'eau potable est déterminée par sa conformité aux normes d'indicateurs microbiologiques. La composition microbiologique de l'eau potable est le principal indicateur de sa qualité et de son aptitude à la consommation. Cela prend en compte à la fois la contamination bactérienne et virale.

La sécurité épidémiologique de l'eau potable dans le SanPiN est évaluée par plusieurs indicateurs. Parmi eux, un rôle important est attribué aux coliformes thermotolérants en tant que véritables indicateurs de contamination fécale et aux coliformes généraux.

Les bactéries coliformes communes (GCB) sont des bâtonnets gram-négatifs, oxydase-négatifs et non sporulés qui peuvent se développer sur des milieux différentiels de lactose, fermentant le lactose en acide et gaz à une température de +37 pendant 24 à 48 heures.

Les bactéries coliformes thermotolérantes (TCB) font partie de l'OKB et ont toutes leurs caractéristiques, mais contrairement à elles, elles sont capables de fermenter le lactose en acide, aldéhyde et gaz à une température de +44 pendant 24 heures. Ainsi, le TCB diffère de l'OKB par sa capacité à fermenter le lactose en acide et en gaz à une température plus élevée. Les coliformes thermotolérants et généraux doivent être absents dans 100 ml d'eau de boisson (dans tous les échantillons avec trois répétitions de l'analyse).

Dans le réseau de distribution des grands systèmes centralisés d'approvisionnement en eau potable (avec un nombre d'échantillons analysés au moins 100 par an), 5 % d'échantillons non standard pour les coliformes totaux sont autorisés, mais pas dans deux prélèvements successifs en un même point.

Le nombre total de micro-organismes (nombre microbien total - TMC) est déterminé par croissance sur gélose mésopatamique à une température d'incubation de 37. Cet indicateur est utilisé pour caractériser l'efficacité de la purification de l'eau potable, il doit être pris en compte lors du suivi de la qualité de l'eau en dynamique. Un écart important de la TMP même à l'intérieur de la valeur standard (mais pas plus de 50 pour 1 ml) sert de signal d'une violation de la technologie de traitement de l'eau. La croissance de TMP dans l'eau du réseau de distribution peut indiquer son état sanitaire défavorable, ce qui contribue à la multiplication des microorganismes du fait de l'accumulation de matière organique ou de fuites, ce qui entraîne l'aspiration d'eaux souterraines contaminées.

Les saprophytes aérobies ne représentent qu'une partie du nombre total de microbes dans l'eau, mais ils sont un indicateur sanitaire important de la qualité de l'eau, car il existe une relation directe entre le degré de pollution par les substances organiques et le nombre microbien. De plus, on pense que plus le nombre total de microbes est élevé, plus il est probable que des agents pathogènes soient présents dans l'eau. Le nombre de microbes dans l'eau du robinet ne doit pas dépasser 100.

La sécurité épidémique de l'eau potable est déterminée par sa conformité aux normes des indicateurs microbiologiques (tableau 1).

Tableau 1. Indicateurs microbiologiques de l'eau potable

Le concept de micro-organismes indicatifs sanitaires

Les principales exigences pour les micro-organismes indicatifs sanitaires : 1. ils doivent avoir un habitat naturel commun avec des micro-organismes pathogènes et être libérés en grand nombre dans l'environnement extérieur ; 2. dans l'environnement extérieur, les micro-organismes à indication sanitaire doivent être répartis aussi uniformément que possible et être plus résistants que les pathogènes. Ils devraient durer plus longtemps dans l'eau, ne pas se multiplier pratiquement, avoir une plus grande résistance aux effets de divers facteurs défavorables, ils devraient montrer moins de variabilité des propriétés et des caractéristiques; 3. Les méthodes de détermination des micro-organismes indicatifs sanitaires doivent être simples et avoir un degré de fiabilité suffisant.

Du point de vue de la microbiologie sanitaire, la qualité de l'eau est évaluée afin de déterminer son danger ou sa sécurité sanitaire et épidémiologique. Pour la santé humaine. L'eau joue un rôle important dans la transmission des agents pathogènes de nombreuses infections, principalement intestinales.

La détermination quantitative directe de toutes les infections pour le contrôle de la qualité de l'eau n'est pas possible en raison de la variété de leurs types et de la complexité de l'analyse.

Une analyse d'un seul échantillon d'eau pour la présence possible des agents responsables de la fièvre typhoïde, de la paratyphoïde A, de la paratyphoïde B, de la dysenterie, de la jaunisse infectieuse, de la fièvre hydrique et de la tularémie chargerait complètement tout le personnel d'un même grand laboratoire bactériologique. De plus, la réponse dans ce cas n'aurait été donnée qu'après 2-3 semaines, c'est-à-dire lorsque la population a déjà bu l'eau enquêtée depuis longtemps.

Compte tenu de l'inutilité évidente d'une détermination détaillée de l'innocuité de l'eau, même en fin XIX siècles, des tentatives ont été faites pour remplacer la recherche de tous les microbes pathogènes aquatiques par un microbe, bien que non pathogène, mais constamment présent dans des excréments humains... On pourrait alors supposer que si l'eau à l'étude est vraiment contaminée par des matières fécales, il peut être dangereux de la boire, car parmi la population en bonne santé, on peut trouver à la fois des porteurs de bacilles et malades. La recherche de tels indicateurs bactériologiques de contamination fécale a été couronnée de succès. Il s'est avéré que les trois microbes suivants sont constamment présents dans les selles humaines : 1) Escherichia coli ; 2) entérocoques ; 3) les bactéries sporulantes anaérobies, principalement Bac. perfingens.

Ainsi, E. coli prédomine dans les eaux usées domestiques. Mais le point n'est pas seulement dans son plus grand contenu. La principale valeur d'un indicateur bactérien de contamination fécale réside dans la vitesse à laquelle la plupart des microbes pathogènes meurent. Ce n'est que si cette condition est remplie que le microbe constamment présent dans les selles humaines sera un indicateur de contamination fécale.

Si nous approchons les habitants permanents découverts de l'intestin de ce point de vue, nous trouverons les suivants : des microbes du groupe Bac. perfingens reste dans l'eau beaucoup plus longtemps que les microbes pathogènes; les entérocoques, au contraire, meurent beaucoup plus tôt ; comme pour Escherichia coli, le temps de sa conservation dans l'eau correspond approximativement au temps de survie des microbes pathogènes.

Par conséquent, le principal indicateur sanitaire et bactériologique de l'eau est E. coli. Seulement en Russie, le seul pays au monde, la qualité de l'eau est contrôlée par la bactérie du groupe E. coli (indice BGKP). Ce groupe comprend tous les représentants du groupe des bactéries intestinales et les représentants opportunistes.

Conformément aux normes GOST 2874-73 et GOST 18963-73, les bactéries du groupe Escherichia coli (BGKP) comprennent des bâtonnets gram-négatifs non sporulés qui fermentent le lactose ou le glucose en acide et en gaz à 37 ° C en 24 heures et n'ont pas d'activité oxydase. Le BGKP comprend des représentants de divers genres - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, mais tous sont libérés dans l'environnement par les intestins des humains et des animaux. A cet égard, leur détection dans l'environnement doit être considérée comme un indicateur de contamination fécale.

Des genres inclus dans le BGKP, le genre Escherichia a la valeur la plus sanitaire et indicative. La présence de toutes ces bactéries dans l'environnement est considérée comme une contamination fécale fraîche.

Escherichia - est l'un des types d'intestins de fond des humains et des animaux. Le genre Escherichia, comprenant l'espèce type E. coli, indicateur de contamination fécale fraîche, raison possible infections toxiques. Les représentants du genre dans l'eau sont traités comme des bactéries coliformes thermotolérantes.

Citrobacter - vit dans les eaux usées, le sol et d'autres objets de l'environnement extérieur, ainsi que dans les excréments de personnes en bonne santé et malades souffrant d'infections respiratoires aiguës. Elles appartiennent au groupe des bactéries opportunistes. (Dictionnaire microbiologique-ouvrage de référence, 1999)

Les inconvénients de Citrobacter en tant que SPMO sont les suivants :

1. une abondance d'analogues dans l'environnement externe.

2. variabilité de l'environnement extérieur.

3. résistance insuffisante aux influences défavorables.

4. la capacité de se reproduire dans l'eau.

5. indicateur flou même de la présence de Salmonella.

Des études récentes ont montré qu'il n'y a pas de corrélation directe entre la présence de bactéries pathogènes et d'indicateurs dans l'eau. Dans les régions avec une charge anthropique intense sur les masses d'eau, une diminution de la teneur en micro-organismes indicateurs avec une modification de leurs propriétés biologiques et culturelles a été notée dans le contexte d'une prédominance quantitative de bactéries pathogènes et pathogènes potentielles.

Enterobacter - vivent dans les intestins des humains et d'autres animaux, se trouvent dans le sol, l'eau, les produits alimentaires, ils provoquent des maladies intestinales, urogénitales, respiratoires, purulentes-inflammatoires chez l'homme.

Klebsiella - vit dans l'eau, le sol, les aliments, les intestins et les voies respiratoires des humains, des mammifères et des oiseaux.

En 1910. Des entérocoques (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) ont été proposés pour le rôle de SPMO.

Les entérocoques sont un genre de bactéries Gram + chimioorganotrophes asporogènes anaérobies facultatives. Les cellules sont polymorphes. Largement répandu dans la nature. Ils sont l'une des espèces de fond des intestins des humains, des mammifères, des oiseaux. On le trouve souvent dans la flore de la peau du périnée et des voies génitales, des fosses nasales, du pharynx, du nez. Ils survivent longtemps dans le sol et la nourriture.

Avantages d'Enterococcus en tant que SPMO :

1. est constamment dans l'intestin humain et est constamment libéré dans l'environnement extérieur. Dans le même temps, Enterococcus faecalis vit principalement dans l'intestin humain. Par conséquent, sa détection indique une contamination par des excréments humains. Enterococcus faecium est présent dans une moindre mesure chez l'homme. Ce dernier se trouve principalement dans les intestins des animaux, bien qu'Enterococcus faecalis soit également relativement rare.

2. incapable de se reproduire dans l'environnement extérieur, Enterococcus faecium se reproduit principalement, mais il a moins d'importance épidémiologique.

3. ne change pas ses propriétés dans l'environnement externe.

4. n'a pas d'analogues dans l'environnement externe.

5. résistant aux influences environnementales défavorables. L'entérocoque est 4 fois plus résistant au chlore que E. coli. C'est son principal avantage. En raison de cette caractéristique, l'entérocoque est utilisé lors de la vérification de la qualité de la chloration de l'eau, ainsi qu'un indicateur de la qualité de la désinfection. Résiste à des températures de 60°C, ce qui lui permet d'être utilisé comme indicateur de la qualité de la pasteurisation. résistant à des concentrations de sel de 6,5 à 17 %. Résistant au pH dans la gamme 3-12.

6. Des milieux hautement sélectifs ont été développés pour l'indication des entérocoques. Le taux de survie des entérocoques dans l'eau se rapproche du taux de survie des entérobactéries pathogènes. Enterococcus est à juste titre le deuxième test sanitaire indicatif après E. coli dans l'étude de l'eau potable.

Actuellement, l'entérococométrie est légalisée dans la norme internationale pour l'eau, en tant qu'indicateur de contamination fécale fraîche. Lorsque des E. coli atypiques sont trouvés dans l'eau, la présence d'entérocoques devient le principal indicateur de contamination fécale fraîche. Malheureusement, dans SanPiN 2.1.4.1074-01, la définition de l'entérocoque n'est pas fournie pour l'eau potable.

Le groupe Proteus est considéré comme les coupables des processus de putréfaction dans la nature, et donc, comme des indicateurs de la présence de matière organique dans l'eau des réservoirs. Ceci s'applique principalement à une espèce - Pr.vulgaris; la deuxième espèce, Pr.mirabilis, est un habitant des intestins des humains et des animaux. Cette différence écologique a permis de juger de la nature de la pollution des eaux et du degré de sa sécurité épidémique. Pr.vulgaris peut être un indicateur de contamination fécale, Pr.vulgaris est un indicateur d'une augmentation de la concentration de matière organique en général. Faiblesses de cet indicateur - la présence inconstante de - Pr.mirabilis dans l'intestin humain et la capacité d'une reproduction assez intensive des deux espèces dans l'eau. Il n'existe pas non plus de méthode de recherche qui permettrait une prise en compte différenciée des deux espèces avec leur présence simultanée dans l'échantillon d'essai. La méthode proposée ne remplit pas cette tâche.

Il a maintenant été montré que les bactéries du genre Proteus se retrouvent dans 98% des cas dans les sécrétions des intestins des humains et des animaux, dont 82% sont des Pr.mirabilis. la détection de proteus dans l'eau indique une contamination de l'objet par des substrats en décomposition et indique un problème sanitaire extrême. La protéométrie est officiellement reconnue aux États-Unis.

La détection de spores de clostridies réductrices de sulfure est effectuée sur des conduites d'eau à partir de sources de surface pour évaluer l'efficacité du traitement technologique de l'eau. Les spores de bactéries réductrices de sulfure ne doivent pas être présentes dans 20 ml d'eau potable après la fin du traitement de l'eau.

En tant qu'indicateur de contamination virale de l'eau potable, le SanPiN comprend les coliphages, qui sont les plus proches des virus intestinaux en termes d'origine biologique, de taille, de propriétés, de résistance aux facteurs environnementaux. Les coliphages ne doivent pas être trouvés dans 100 ml d'eau potable traitée.

Avec cette méthode d'analyse de l'eau, une certaine quantité d'eau passe à travers une membrane spéciale dont la taille des pores est de l'ordre de 0,45 micron. En conséquence, toutes les bactéries présentes dans l'eau restent à la surface de la membrane. Après cela, la membrane contenant les bactéries est placée pendant un certain temps dans un milieu nutritif spécial à une température de 30-37 ° C. Au cours de cette période, appelée période d'incubation, les bactéries ont la possibilité de se multiplier et de former des colonies distinctes qui sont déjà faciles à dénombrer. En conséquence, vous pouvez observer ce qui suit : Ou même une telle image :

Étant donné que cette méthode d'analyse de l'eau consiste uniquement à déterminer le nombre total de bactéries formant des colonies différents types, alors d'après ses résultats il est impossible de juger sans ambiguïté de la présence de microbes pathogènes dans l'eau. Cependant, une numération microbienne élevée indique une contamination bactériologique générale de l'eau et haute probabilité la présence d'organismes pathogènes.

Lors de l'analyse de l'eau, il est nécessaire de contrôler non seulement la teneur en substances toxiques substances chimiques, mais aussi le nombre de micro-organismes caractérisant la contamination bactériologique de l'eau potable TMC-nombre microbien total Dans l'eau d'alimentation en eau centralisée ce nombre ne doit pas dépasser 50 CFU/ml, et dans les puits, puits - pas plus de 100 CFU/ml

L'examen sanitaire et microbiologique de l'eau est effectué dans un
commande avec vue surveillance continue, ainsi qu'à des fins épidémiologiques spéciales
Kim indications. Les principaux objets de ces recherches sont :

- l'eau potable de la centrale d'approvisionnement en eau (eau du robinet) ;

- l'eau potable de l'approvisionnement en eau non centralisé ;

- l'eau des sources d'eau de surface et souterraines ;

— les eaux usées;

- les eaux des zones côtières des mers ;

- eau de piscine.

Les principaux indicateurs permettant d'évaluer l'état microbiologique de l'eau potable conformément aux textes réglementaires en vigueur sont :

1. Nombre total de microbes (TMC) - le nombre de bactéries mésophiles dans 1 ml de bœuf.

Si titre- le plus petit volume d'eau (en ml) dans lequel au moins un vivant
cellule microbienne liée à BGKP.
Indice BGKP- la quantité de BGKP dans 1 litre d'eau.

3. Le nombre de spores de clostridies sulfito-réductrices dans 20 ml d'eau.

4. Le nombre de coliphages dans 100 ml d'eau.

La détermination de la TMP permet d'évaluer le niveau de contamination microbiologique de l'eau potable. Cet indicateur est indispensable pour la détection urgente d'une contamination microbienne massive.

Nombre total de microbes C'est le nombre de microorganismes aérobies mésophiles et anaérobies facultatifs capables de former des colonies sur gélose nutritive à 37°C et dans les 24 heures, visibles au grossissement deux fois.

Lors de la détermination du nombre total de microbes, 1 ml de l'eau d'essai est introduit dans une boîte de Pétri stérile et 10 à 12 ml de gélose nutritive fondue chaude (44 ° C) sont versés. Le milieu est mélangé doucement avec de l'eau, uniformément et
sans bulles d'air, se répandre sur le fond de la tasse, puis fermer avec un couvercle et laisser jusqu'à solidification. Les cultures sont incubées dans un thermostat à 37°C pendant 24 heures. Compter le total colonies cultivées dans les deux plaques, et déterminer la moyenne. Le résultat final est exprimé par le nombre d'unités formant colonie (UFC) dans 1 ml d'eau d'essai. 1 ml d'eau potable ne doit pas contenir plus de 50 UFC

Définition de BGKP
Dans le même temps, les bactéries coliformes communes - OKB et les bactéries coliformes thermotolérantes - TKB sont déterminées.

OKB - bâtonnets gram-négatifs, non sporulés, qui fermentent le lactose en acide et en gaz à 37 ° C pendant 24 à 48 heures. Les TKB sont inclus dans le nombre d'OKB, ils les mâchent avec des signes, mais je fermente à 44 ° C. Pour déterminer les entérobactéries - la méthode des filtres Mebran ou du titrage.

Numéro microbien - les principaux critères d'évaluation de l'état microbiologique de l'eau potable, basé sur l'existant documents normatifs, est le TMC (total microbial number), qui caractérise le nombre de bactéries aérobies et anaérobies dans un millilitre d'eau, formées par jour à une température de 37 degrés, dans un milieu nutritif.

Indicateurs de qualité de l'eau potable dans les systèmes d'approvisionnement en eau.

Cet indicateur est quasiment indispensable pour la détection rapide d'une contamination microbienne massive.

Pour détermination de la numération microbienne totale un millilitre de l'eau d'essai est ajouté dans une boîte de Pétri stérile, puis 10-15 ml de gélose nutritive chaude (environ 44 ° C) sont versés sous forme fondue. Le milieu est soigneusement mélangé avec de l'eau, réparti uniformément et sans bulles d'air au fond de la boîte, puis fermé avec un couvercle et laissé dans la boîte de Pétri jusqu'à ce qu'il se solidifie. La même chose est faite dans une autre tasse. Le semis au thermostat est incubé à 37°C pendant 24 heures. Ensuite, sous un grossissement 2x sous un microscope, le nombre total de colonies cultivées dans deux boîtes est compté et la moyenne est déterminée. 1 ml d'eau potable ne doit pas contenir plus de 50 UFC.

(méthode principale)

La méthode est basée sur la filtration d'un certain volume d'eau (300 ml) à travers des filtres à membrane, la culture des cultures sur un milieu de diagnostic différentiel avec du lactose (Endo) et l'identification ultérieure des colonies par leurs caractéristiques culturelles et biochimiques.

Les filtres à membrane préparés pour l'analyse (bouillis ou autrement stérilisés) sont placés avec des pinces stériles dans l'entonnoir de l'appareil de filtrage. Un volume d'eau mesuré est versé dans l'entonnoir de l'appareil et un vide est créé. Après filtration, le filtre est retiré et, sans le retourner, est placé à la surface du milieu de culture Endo.

3 filtres peuvent être placés dans une tasse. Lors de l'examen de l'eau potable, 3 volumes de 100 ml sont filtrés. lors de l'analyse d'une eau de qualité inconnue, il est conseillé de filtrer d'autres volumes d'eau pour obtenir des colonies isolées sur le filtre (10,40, 100 et 150 ml).

Les boites filtrantes sont incubées tête en bas dans un thermostat à 37°C pendant 24 heures.

S'il n'y a pas de croissance sur les filtres ou s'il s'est développé des colonies atypiques filmées, moisies, floues, elles donnent un résultat négatif. OKB et TKB sont absents dans 100 ml d'eau testée.

Lors de la croissance sur des filtres de lactose-positif isolé typique (rouge foncé avec des impressions sur verso filter) colonies, compter leur nombre et procéder à la confirmation de leur appartenance aux OKB et TKB.

Une microscopie des frottis de 3-4 colonies colorées selon Gram est réalisée (les Gram-négatifs sont pris en compte);

Déterminer la présence d'oxydase (tenir compte de l'oxydase négative, car les bâtonnets à Gram négatif oxydase-positive n'appartiennent pas aux entérobactéries, mais peuvent être, par exemple, des pseudomonades);

Déterminer la fermentation du lactose en acide et gaz à une température de 37°C, ce qui est important pour les colonies faiblement colorées et leur relation avec OKB, et une température de 44 ± 0,5°C, afin de résoudre le problème de leur appartenance à TKB.

Formulation du test oxydase

Sur papier humidifié avec une solution alcoolique à 1% de -naphtol et à 1% solution aqueuse diméthylphénylènediamine, appliqué avec une boucle de platine ou une tige de verre sur une partie de la colonie colorée. la réaction est considérée comme positive si, en 1 minute, un maximum de 4 apparaît bleu ou violet. Les colonies oxydase-positives ne sont pas prises en compte et ne font pas l'objet de recherches complémentaires.

Vous pouvez transférer le filtre avec les colonies sur du papier imbibé de réactif. Vous pouvez utiliser des systèmes de papier prêts à l'emploi (NIB) humidifiés avec de l'eau distillée.

Des parties de colonies de bactéries gram-négatives oxydase-négatives sont testées pour leur capacité à fermenter le lactose. Dans ce cas, un milieu semi-liquide avec du lactose et un indicateur de pH est utilisé. L'inoculation est réalisée par une injection à fond dans 2 tubes à essai. L'un est incubé à une température de 37 ± 1°C pendant 24-48 heures pour confirmer la relation à OKB, l'autre à une température de 44 ± 0,5°C pendant 24 heures, il est possible de compter après 4-6 heures pour confirmer la présence de la tuberculose.

Lorsque les colonies sont appliquées sur le filtre, elles sont tamisées, puis les colonies isolées sont identifiées. Les colonies sont comptées comme OKB - si elles sont rouges sur Endo, elles contiennent des bâtonnets gram-négatifs oxydase-négatifs qui décomposent le lactose à une température de 37 ° C en acide et gaz. Les colonies sont comptées comme TKB si elles contiennent des bâtonnets gram-négatifs oxydase-négatifs fermentant le lactose à une température de 44°C en acide et gaz (Schéma n° 2).

SCHÉMA N°2

Date de publication : 2014-11-02 ; Lire : 1811 | Violation du droit d'auteur de la page

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018 (0,001 s) ...

Nombre total de microbes

Étant donné que cette méthode d'analyse de l'eau implique uniquement la détermination du nombre total de bactéries formant des colonies de différents types, ses résultats ne peuvent pas être utilisés pour juger sans ambiguïté de la présence de microbes pathogènes dans l'eau. Cependant, une numération microbienne élevée indique une pollution bactériologique générale de l'eau et une forte probabilité de présence d'organismes pathogènes.

Lors de l'analyse de l'eau, il est nécessaire de contrôler non seulement la teneur en produits chimiques toxiques, mais également le nombre de micro-organismes qui caractérisent la contamination bactériologique de l'eau potable par le nombre total de microbes TMC. Dans l'approvisionnement en eau centralisé, ce nombre ne doit pas dépasser 50 UFC / ml, et dans les puits, les puits - pas plus de 100 UFC/ml

L'examen sanitaire et microbiologique de l'eau est effectué dans un
pour les besoins de la surveillance actuelle, ainsi que pour des mesures épidémiologiques spéciales
Kim indications. Les principaux objets de ces recherches sont :

- l'eau potable de la centrale d'approvisionnement en eau (eau du robinet) ;

- l'eau potable de l'approvisionnement en eau non centralisé ;

- l'eau des sources d'eau de surface et souterraines ;

- les eaux usées;

- les eaux des zones côtières des mers ;

- eau de piscine.

Les principaux indicateurs permettant d'évaluer l'état microbiologique de l'eau potable conformément aux textes réglementaires en vigueur sont :

1. Nombre total de microbes (TMC) - le nombre de bactéries mésophiles dans 1 ml de bœuf.

Si titre- le plus petit volume d'eau (en ml) dans lequel au moins un vivant
cellule microbienne liée à BGKP.
Indice BGKP- la quantité de BGKP dans 1 litre d'eau.

3. Le nombre de spores de clostridies sulfito-réductrices dans 20 ml d'eau.

4. Le nombre de coliphages dans 100 ml d'eau.

Lors de la détermination du nombre total de microbes, 1 ml de l'eau d'essai est introduit dans une boîte de Pétri stérile et 10 à 12 ml de gélose nutritive fondue chaude (44 ° C) sont versés. Le milieu est mélangé doucement avec de l'eau, uniformément et
sans bulles d'air, se répandre sur le fond de la tasse, puis fermer avec un couvercle et laisser jusqu'à solidification. Les cultures sont incubées dans un thermostat à 37°C pendant 24 heures. Le nombre total de colonies cultivées dans les deux plaques est compté et la moyenne est déterminée. Le résultat final est exprimé par le nombre d'unités formant colonie (UFC) dans 1 ml d'eau d'essai. 1 ml d'eau potable ne doit pas contenir plus de 50 UFC

Définition de BGKP
Dans le même temps, les bactéries coliformes communes - OKB et les bactéries coliformes thermotolérantes - TKB sont déterminées.

Numéro microbien - les principaux critères d'évaluation de l'état microbiologique de l'eau potable, sur la base des documents réglementaires en vigueur, est le TMC (total microbial number), qui caractérise le nombre de bactéries aérobies et anaérobies dans un millilitre d'eau, formé par jour à une température de 37 degrés, dans un milieu nutritif. Cet indicateur est quasiment indispensable pour la détection rapide d'une contamination microbienne massive.

Principes de rationnement de l'eau potable

La même chose est faite dans une autre tasse. Le semis au thermostat est incubé à 37°C pendant 24 heures. Ensuite, sous un grossissement 2x sous un microscope, le nombre total de colonies cultivées dans deux boîtes est compté et la moyenne est déterminée. 1 ml d'eau potable ne doit pas contenir plus de 50 UFC.

Taper